基本操作程序
实验动物处死→取材（3×3×1.5m）→固定（12~24h）→流水冲洗12~24h→相应处理→脱水（每级酒精1~2h）→透明（二甲苯两次，每次30~60min）→浸蜡（低熔点石蜡30~45min，高熔点石蜡1h左右）→包埋、切片（厚度5~10微米）→展片、烘干（以上示教）→染色、封固（自己操作）
1 取材
实验动物：猫、狗、兔、大小鼠、豚鼠等
处死方法：
麻醉：乙醚、氯仿、戊巴比妥等，较大或凶残动物如兔、猫、狗等
直接杀死：颈动脉或股动脉放血
断头或击头：小动物（鼠）
要领：
根据动物组织器官形态学特点，确定实验动物
根据取材要求，选择处死方法
根据动物组织部位的特点确定切面（横切、纵切或矢状切）、取材
组织块小，厚度最好不超过1cm
取材刀剪锋利
不能来回挫动器官或组织
生理盐水冲洗污物
2 固定
定义：利用化学试剂将动物组织的蛋白质等成份凝固，使其保持生前结构。
固定方法：
直接固定：较小的组织
灌注固定：较大的器官
蒸汽固定：甲醛蒸汽
固定液：
常用10%福尔马林、Zenker液、Bouin液等
要领：
组织器官不能有污物
固定液量是组织块容积的10~30倍
较大的组织先预固定3~4h，再修成适当大小的组织块
固定后进行必要的处理：流水冲洗、酒精洗涤、脱汞、脱钙等
3 脱水
利用化学试剂将组织内的水分转换出来。这种试剂称脱水剂。
脱水剂：常用酒精、丙酮、正丁醇等。
酒精脱水要领：
脱水剂体积是组织块容积的10~30倍
酒精需期过滤或更换
从低浓度开始高浓度过渡
50%以上酒精务必将脂肪脱净
高浓度酒精（95%以上）不能停留过久，避免变硬发脆
脱水至中途不能进行下去可返回80%酒精
70~80%酒精可保存组织块
4 透明
脱水后的组织块含有大量酒精，酒精不溶于石蜡，借助既溶于酒精又溶于石蜡的介质（透明剂），将酒精转换出来，使组织呈现透明状。
透明剂：常用二甲苯等。
要领：
透明剂体积为组织块容积的5~10倍
组织块进入透明剂时发浑，脱水未净，重新返回无水酒精脱水
二甲苯待的时间不能太久，避免发脆变硬，一般不超过1h
定期过滤或更换二甲苯
5 浸蜡
经过透明剂处理的组织，已能与熔化的石蜡相溶。
先入低熔点石蜡（52℃以下），再入高熔点石蜡（58℃以上）
要领：
从透明剂取出的组织要立干，尽量不带透明剂入石蜡
石蜡事先反复融化、过滤
低熔点石蜡不超过45min，高熔点石蜡不超过1h。总浸蜡时间3~4h
浸蜡在恒温箱内或包埋机内进行，温度65℃左右
6 包埋
将浸过石蜡的组织块切面方向埋入石蜡。包埋用的石蜡称包埋蜡，为高熔点石蜡。
要领：
包埋蜡提前熔化，过滤除去杂质
先往包埋框内倒（放）入包埋蜡
从蜡缸中夹取组织块，切面向下，放入包埋蜡内
包埋时保持温度65℃左右，不能凝固
包埋后冷却即成蜡块
取出蜡块，修成正方形或长方形
7 切片
将修好的蜡块固定于切片机头上
上好刀片，摇动手轮，蜡块切面靠近刀片
调整适当的百度，调至修片状态，均匀摇动手轮，使组织切面完全暴露出来
切换到切片状态，调整切片厚度（3~10㎛），均匀摇动手轮，将蜡块切成蜡片
连续摇动，形成蜡带（以下同学按老师要求操作）
处理干净的载玻片涂上粘附剂（蛋白甘油、多聚赖氨酸等）
往摊片池内装上水，升温至43~45℃
将切片放入水中，切成小片
待切片展平后，用探针或镊子将其捞在载玻片一端（⅓）处
立干水分，置烤箱内烘干（37℃过夜或58℃3~4h）
8 染色
（以下同学操作）
基本步骤：
二甲苯内脱尽石蜡
无水酒精洗涤干净
经95%、90%、80%、70%酒精下行至水
苏木精染色
盐酸酒精分色，水洗或70%酒精洗涤后，入氨酒精返蓝
水洗后入80%、90%酒精后，伊红染色
95%酒精分色，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片
要领：
石蜡必须脱干净
染色前组织切片进行相应的处理
含汞固定液（Zenker液、Helly液）固定的组织，染色前进行脱汞处理
含苦味酸固定液（Bouin液）固定的组织，于70%酒精尽量脱去黄色
脱钙处理的组织（股骨、内耳等），于饱和碳酸锂水溶液处理
长期固定于福尔马林的组织，进行脱福尔马林色素处理
盐酸酒精分色应在镜下检查，适宜后立即中断分色操作
伊红染色应与苏木精对比（镜下），原则上是红、蓝对比分明
脱水干净、透明彻底
封片时排除气泡的产生
各种染色试剂定期换新液
讨论
组织块脱水不完全的原因
组织块变硬发脆的原因
组织切片皱褶的原因
组织切片着色不均匀的原因
切片皱褶的原因
染色后切片镜下出现均匀的黑色颗粒？
哪些组织容易被苏木精着色，哪些组织则为伊红染色？
二甲苯在标本制作过程中都有些什么作用？
苏木精染色后镜检，能判定是哪个器官或组织吗？
气泡产生的原因和解决办法？
